二手蛋白純化儀是利用顆粒不同程度的顆粒吸附力來使分離的目的達到蛋白質的選擇吸附分離◕✘↟▩•。裝置採用低溫有機溶劑沉澱法₪▩•，使用如甲醇₪▩•，乙醇等與水可混溶的有機溶劑₪▩•，降低多數蛋白質的溶解度並且將其析出₪▩•，和鹽析相比較₪▩•，這種方法的解析度更加的高₪▩•，然而蛋白質比較容易變形₪▩•，需要在低溫下進行◕✘↟▩•。
1.如果凝膠過濾的介質是乾粉₪▩•，則需在凝膠過濾緩衝液中*溶脹◕✘↟▩•。
2.在遠離過往通道及直接光照的恆溫環境₪▩•，將層折柱垂直安裝在穩固的實驗室支架上◕✘↟▩•。
3.用一注射器將凝膠過濾緩衝液從柱子的輸出管注入柱子₪▩•，至緩衝液達到柱子支援體平面之上₪▩•，注射器留在輸出端以堵住柱子◕✘↟▩•。
4.沿著一根順柱子內壁而放的玻璃棒將凝膠混懸物倒入柱子至所設高度₪▩•，再小心往凝膠頂部加入1cm高的一層緩衝液₪▩•，並連線緩衝液貯存容器₪▩•，取去堵著柱子輸出管的注射器₪▩•，用2~3倍柱床體積的緩衝液請洗柱子◕✘↟▩•。
5.流盡柱子凝膠頂部上面的緩衝液││、關閉其輸出管◕✘↟▩•。
6.加入相當於柱床體積1%~5%的蛋白質樣品◕✘↟▩•。開放輸出管₪▩•，讓樣品流進柱床₪▩•，凝膠上面的柱子內壁以緩衝液沖洗◕✘↟▩•。
7.在凝膠頂上用吸管加入1cm高的緩衝液層₪▩•，重新與緩衝液貯存容器連線₪▩•，開始洗脫◕✘↟▩•。
8.分部收集流出液◕✘↟▩•。每分部相當於1%總柱床體積₪▩•，分別測每個分部的A280₪▩•，並各取小份樣品測生物活性₪▩•，選出有活性的分部用SDS-PAGE檢測所含蛋白質的數量和質量₪▩•，合併含目標蛋白的分部◕✘↟▩•。
9.用2~3個柱床體積的凝膠過濾緩衝液洗柱₪▩•，柱子儲存在含0.02%疊氮鈉的緩衝液中₪▩•，柱於可無限次地使用◕✘↟▩•。
